Biologia molecolare per malattie infettive

Area Riservata

La metodica PCR permette di individuare la presenza di un agente infettivo, tramite il reperimento del suo DNA o RNA. Inoltre la metodica da noi offerta prevede, oltre alla segnalazione o meno relativa all'agente infettivo ricercato, anche una valutazione semiquantitativa dello stesso. La quantificazione del DNA è di particolare interesse in corso di leishmaniosi e nello studio delle Coronavirosi feline.
I tempi di refertazione sono attualmente di circa 2-5 gg. lavorativi. Il costo dei test è segnalato nel nostro tariffario. Per ogni informazione siete pregati di contattare il Laboratorio.

Il Dott. Michele Trotta, il medico veterinario responsabile del servizio PCR, vi può fornire ogni indicazione relativamente a campionamenti e conservazione dei prelievi. La sua mail è pcr@sanmarcovet.it

Durante i mesi estivi è preferibile mantenere refrigerati i campioni.

Vi invitiamo ad inserire, al momento della richiesta dalla vostra pagina web riservata, i dati relativi al tipo di campione (indispensabile !), il segnalamento e i dati clinici, comprensivi di eventuali terapie recenti. Se richiedete la ricerca del Cimurro, è indispensabile inoltre indicare se il cane (o il furetto) è stato recentemente vaccinato. Inoltre è richiesto il nome del vaccino impiegato. Queste indicazioni sono importantissime per individuare positività legate alla vaccinazione vs. malattie spontanee.

Per ogni agente infettivo da noi ricercato sono segnalati i campioni su cui è possibile eseguire la ricerca e alcuni commenti. La ricerca può anche essere eseguita su tessuti freschi, conservati in soluzione fisiologica o su inclusi in paraffina. Purtroppo i campioni tissutali conservati in formalina, presentano una degradazione del DNA che può determinare una negativizzazione del campione. E' indispensabile contattare il Dott. Trotta prima di ogni richiesta speciale per valutare caso per caso l'idoneità del campione.

NB: i tamponi per le indagini PCR non devono venire in contatto con terreni di trasporto o altro materiale.

Il costo delle PCR si riferisce ad ogni singolo agente eziologico ricercato e per tessuto/campione biologico inviato. Se si vuole eseguire una PCR su differenti tessuti, ogni ricerca aggiuntiva è tariffata al 50% rispetto al costo originale

Agenti Batterici ricercati mediante tecniche molecolari

Anaplasma phagocytophilum (Ehrlichia granulocitaria canina)/Anaplasma platys (Ex Ehrlichia platys)

Campioni da utilizzare:
-Sangue intero in K3EDTA
-Midollo in K3EDTA
-Aspirato linfonodale
-Liquido cefalo-rachidiano

Bartonella henselae, Bartonellosi o Malattia da graffio di gatto

Campioni da utilizzare:
-Sangue intero in K3EDTA
-Raschiato gengivale
-Aspirato linfonodale

Commento:
Bartonella henselae è in grado di determinare infezioni croniche, con associate risposte infiammatorie, ad esempio gengiviti.
In base ai nostri più recenti studi, questa infezione è presente in almeno il 10% dei gatti.

Borrelia burgdorferi sensu lato, Borreliosi o Malattia di Lyme

Campioni da utilizzare:
-Sangue intero in K3EDTA
-Liquido cefalo-rachidiano
-Liquido articolare in K3EDTA
-Aspirato linfonodale

Commento:
Esistono tre differenti agenti infettivi classificati come Borrelie: Borrelia burgdorferi sensu stricto, comune negli USA ma rara in Europa; Borrelia afzelii e Borrelia garinii. Presso il nostro laboratorio, mediante PCR, viene effettuata la ricerca per la Borrelia burgodorferi sensu lato, in grado di rilevare tutte e tre le specie.

Bordetella bronchiseptica, bordetellosi

Campioni da utilizzare:
-Tampone orale
-Tampone nasale
-Lavaggio broncoalveolare
-Lavaggio tracheale

Commento:
Bordetella bronchiseptica è in grado di determinare infezione delle vie respiratorie sia nel cane che nel gatto.

Brucella canis, brucellosi

Campioni da utilizzare:
-Sangue in K3EDTA
-Aspirato linfonodale
-Liquido seminale
-Tampone vaginale
-Feto abortito, spedire pezzi di fegato, rene o polmone in soluzione fisiologica, non in formalina.

Chlamydia felis, clamidiosi felina

Campioni da utilizzare:
-Tampone congiuntivale
-Tampone nasale

Chlamydia psittaci, clamidiosi aviare

Campioni da utilizzare:
-Tampone congiuntivale
-Tampone nasale
-Tampone fecale
-Feci

Ehrlichia canis, Ehrlichiosi monocitaria canina

Campioni da utilizzare:
-Sangue intero in K3EDTA
-Midollo in K3EDTA
-Aspirato linfonodale, aspirato splenico
-Liquido cefalo-rachidiano

Commento:
Presso il nostro laboratorio, mediante PCR real-time, viene effettuata la ricerca dell'Ehrlichia canis con la contemporanea quantificazione della carica batterica rilevata.

Emobartonellosi del gatto, infezione da Mycoplasma haemofelis e Candidatus mycoplasma haemominutum

Campioni da utilizzare:
-Sangue intero in K3EDTA

Commento:
Presso il nostro laboratorio, mediante PCR real-time, viene effettuata la ricerca per entrambi gli agenti eziologici, con la contemporanea identificazione della specie di Mycoplasma rilevato.
Nel caso di animali risultati positivi all'infezione da Mycoplasma, si consiglia di ripetere la ricerca mediante PCR durante la terapia e alla fine della stessa (dopo 15 giorni dall'ultima somministrazione del farmaco), per valutare l'efficacia del trattamento nella risoluzione dell'infezione.

Emobartonellosi del cane, infezione da Mycoplasma haemocanis e Candidatus mycoplasma haematoparvum

Campioni da utilizzare:
-Sangue intero in K3EDTA

Leptospira interrogans, leptospirosi

Campioni da utilizzare:
-Sangue intero in K3EDTA
-Urine in K3EDTA
-Porzioni di fegato o rene, in provetta con soluzione fisiologica, e non in formalina

Commenti:
La Leptospira interrogans è molto sensibile agli antibiotici ed anche una singola somministrazione, è in grado di negativizzare il sangue e le urine. Pertanto, come per altre indagini molecolari per la ricerca di agenti batterici, il campionamento va effettuato prima di ogni intervento terapeutico. Trattandosi di una zoonosi, i campioni per la ricerca della Leptospira interrogans, devono essere accuratamente protetti, per evitare perdite di fluidi durante il trasporto.

Mycobacterium spp., micobatteriosi

Campioni da utilizzare:
-Aspirato linfonodale
-Lavaggio tracheale
-Lavaggio broncoalveolare
-Lesioni nodulari, da spedire in provetta con soluzione fisiologica, e non in formalina.
-Porzioni di organi, da spedire in provetta con soluzione fisiologica, e non in formalina.

Rickettsia spp., R. conorii, R. rickettsii, R. spp, rickettsiosi

Campioni da utilizzare:
-Sangue intero in K3EDTA
-Midollo in K3EDTA
-Aspirato linfonodale
-Liquido cefalo-rachidiano

Commento:
Presso il nostro laboratorio, mediante PCR real-time, è possibile effettuare la quantificazione della carica batterica rilevata. Per una precisa identificazione di specie, bisogna poi procedere ad analisi di sequenziamento, che dovrà essere concordata con il laboratorio.

Agenti parassitari ricercati mediante tecniche molecolari

Giardia intestinalis

Campioni da utilizzare:
-Tampone fecale
-Feci

Commenti:
L'infezione da Giardia intestinalis è molto frequente nei cuccioli di cani e gatti, che vivono in ambienti ad alta densità di popolazione, come negli allevamenti.

Babesia spp

Campioni da utilizzare:
- Sangue intero in K3EDTA

Commenti:
Presso il nostro laboratorio, mediante PCR convenzionale, viene effettuata la ricerca per Babesia species, che comprende: Babesia canis canis, Babesia canis vogeli, Babesia canis rossi, Babesia gibsoni e Theileria annae. Per una precisa identificazione di specie, si procede ad ulteriori analisi mediante PCR-RFLP o sequenziamento diretto, che dovranno essere concordati con il laboratorio.

Babesia nel cavallo

-Sangue intero in K3EDTA

Commenti:
Presso il nostro laboratorio, mediante PCR convenzionale, viene effettuata contemporaneamente la ricerca per le due principali Babesie del cavallo: Babesia caballi e Babesia equi.

Cytauxzoon sp

Campioni da utilizzare:

-Sangue intero in K3EDTA

Commenti:
La cytauxzoonosi è un'infezione sostenuta da piroplasmi del genere Cytauxzoon sp. recentemente osservata anche in gatti italiani. E' una malattia trasmessa da vettori, ed è responsabile di anemia.

Hepatozoon spp

Campioni da utilizzare:
-Sangue intero in K3EDTA
-Midollo in k3EDTA
-Aspirato linfonodale

Leishmania infantum

Campioni da utilizzare:
-Sangue intero in K3EDTA
-Midollo in K3EDTA
-Aspirato linfonodale
-Urine in K3EDTA
-Liquido cefalo-rachidiano
-Umor acqueo
-Biopsia cutanea

Commenti:
Presso il nostro laboratorio, mediante PCR real-time, è possibile effettuare la quantificazione della carica parassitaria rilevata, quando si tratta di campioni fluidi come: sangue, midollo, versamenti e urine. Questa informazione risulta fondamentale per la valutazione della durata del trattamento e della efficacia dello stesso.
Tale tipo di metodica non è specie-specifica, pertanto può essere eseguita anche da campioni provenienti da specie animali diverse dal cane, come gatti, furetti e cavalli, specie nelle quali sono state descritte infezioni da Leishmania infantum anche in Italia.

Neospora caninum

Campioni da utilizzare:
- Liquido cefalo-rachidiano

Toxoplasma gondii

Campioni da utilizzare:
-Liquido cefalo-rachidiano

Tritrichomonas foetus

Campioni da utilizzare:
-Tampone fecale
-Feci

Commenti:
La trichomoniasi intestinale è una patologia descritta solo negli ultimi anni. Nei gatti determina diarrea e disturbi del tratto gastro-enterico, della durata variabile da molti mesi ad alcuni anni. L'infezione è stata segnalata soprattutto in gatti da esposizione e di allevamento. Si consiglia di eseguire il test, prima di introdurre nuovi soggetti in allevamento.

Agenti virali ricercati mediante tecniche molecolari

Adenovirus di tipo 1 (CAV1), Epatite infettiva di Rubarth

Campioni da utilizzare:
-Sangue intero in K3EDTA
-Urine in k3EDTA
-Umor acqueo
-Liquido cefalo-rachidiano
-Porzione di fegato, in provetta con soluzione fisiologica, e non in formalina

Adenovirus di tipo 2 (CAV2), adenovirosi respiratorio

Campioni da utilizzare:
-Tampone orale
-Tampone nasale
-Lavaggio broncoalveolare
-Lavaggio tracheale

Calicivirus

Campioni da utilizzare:
-Tampone oculo-congiuntivale
-Tampone orale
-Liquido cefalo-rachidiano

Cimurro

Campioni da utilizzare:
-Sangue intero in K3EDTA
-Tampone oculo-congiuntivale
-Tampone nasale
-Tampone fecale
-Feci
-Liquido cefalo-rachidiano, quando presenti segni neurologici
-Umor acqueo
-Raschiato cuscinetti plantari, da inserire in una provetta sterile

Commento:

Il virus del cimurro responsabile di infezione nei cani è molto simile ai ceppi virali usati per le vaccinazioni. Si ritiene utile specificare il tipo di vaccino e/o la casa produttrice, nel momento in cui si voglia procedere a ricerare questo agente eziologico mediante PCR.
Cani che sono stati vaccinati per il cimurro da meno di 20 giorni, possono risultare positivi alla ricerca del cimurro mediante PCR, senza essere infetti.

La ricerca del cimurro viene effettuato con identiche modalità anche nel furetto.

Coronavirus nel gatto

Campioni da utilizzare:
-Tampone fecale
-Feci
-Sangue intero
-Liquido di versamento
-Aspirato linfonodale
-Umor acqueo

Commenti:
I metodi molecolari disponibili al momento, ricercano il Coronavirus spp. e non sono in grado di discrminare tra il virus responsabile della FIP ed il virus presente a livello enterico. Un risultato positivo mediante tecnica PCR deve essere sempre valutato in relazione allo stato clinico dell'animale e agli altri esami di laboratorio.
La presenza del virus nel tampone fecale e/o nelle feci non è indicativo di malattia in atto, ma solo di presenza del virus a livello intestinale. Gatti con alta carica virale nel tampone fecale e nelle feci, sono responsabili di una disseminazione del virus nell'ambiente esterno. Si raccomanda particolare attenzione nel caso si tratti di gatte da destinare alla riproduzione, per evitare che possano infettare i cuccioli alla nascita.

Coronavirus nel cane

Campioni da utilizzare:
-Tampone fecale
-Feci

Commenti:
Le infezioni da Coronavirus possono avere un'importanza clinica soprattutto nei cani giovani, e possono complicare infezioni concomitanti da Parvovirus.

FeLV, Virus della Leucemia Felina

Campioni da utilizzare:
-Sangue intero in K3EDTA
-Midollo in K3EDTA
-Liquido cefalorachidiano
-Tampone gengivale

Commenti:
Si consiglia di effetture la ricerca mediante PCR dal midollo, nei gatti che presentano patologie mieoloproliferative o mielodisplasie, e che sono risultati negativi alla PCR da sangue o alla sierologia.

FIV, Virus dell'Immunodeficienza Felina

Campioni da utilizzare:
-Sangue intero in K3EDTA
-Midollo in K3EDTA
-Liquido cefalorachidiano
-Tampone gengivale

Commenti:

Herpes virus del gatto

Campioni da utilizzare:
-Tampone oculo-congiuntivale
-Tampone orale
-Tampone vaginale
-Tampone prepuziale
-Feto abortito, spedire pezzi di fegato, rene o polmone in soluzione fisiologica, non in formalina.

Herpes virus del cane

Campioni da utilizzare:
-Tampone vaginale
-Tampone prepuziale
-Liquido seminale
-Feto abortito, spedire pezzi di fegato, rene o polmone in soluzione fisiologica, non in formalina.

Commenti:
Nella cagna la carica virale sulle mucose aumenta durante il ciclo estrale, in particolare nel proestro, al momento dell'aborto o nel puerperio, pertanto si consiglia di eseguire il campionamento in questi periodi.

Papillomavirus

Campioni da utilizzare:
-Nodulo in soluzione fisiologica, e non in formalina

Parvovirus del cane

Campioni da utilizzare:
-Tampone fecale
-Feci

Parvovirus del gatto

Campioni da utilizzare:
-Sangue intero in K3EDTA
-Midollo in K3EDTA
-Tampone fecale
-Liquido cefalo-rachidiano
-Feci

Virus della Parainfluenza canina (CPiV)

Campioni da utilizzare:
-Tampone orale
-Tampone nasale
-Lavaggio broncoalveolare
-Lavaggio tracheale